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血管性血友病因子(VWF)單克隆抗體注意事項(xiàng)

點(diǎn)擊次數(shù):536 更新時(shí)間:2025-07-17

     在操作血管性血友病因子(VWF)單克隆抗體時(shí),需嚴(yán)格遵守以下注意事項(xiàng)以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和人員安全:  

1. 抗體儲(chǔ)存與復(fù)溶

  - 凍干抗體應(yīng)在-20℃或更低溫度下長(zhǎng)期保存,避免反復(fù)凍融。復(fù)溶時(shí)使用無(wú)菌去離子水或指定緩沖液,輕柔混勻后靜置10-15分鐘,避免劇烈震蕩導(dǎo)致蛋白變性。  

  - 復(fù)溶后的抗體若需分裝,建議按單次使用量保存于4℃(短期)或-80℃(長(zhǎng)期),并標(biāo)注日期及濃度。  

 2. 實(shí)驗(yàn)環(huán)境與防護(hù)

  - 操作應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行,尤其是處理患者樣本時(shí),需穿戴實(shí)驗(yàn)服、手套及護(hù)目鏡,避免氣溶膠污染。  

  - 若抗體含防腐劑(如疊氮鈉),需注意其毒性,廢棄液體應(yīng)統(tǒng)一收集處理,不可直接排放。  

3. 樣本處理與干擾因素

  - 檢測(cè)前需確認(rèn)樣本(如血漿)采集規(guī)范,避免溶血或脂血干擾結(jié)果。高濃度類風(fēng)濕因子或異嗜性抗體可能導(dǎo)致假陽(yáng)性,建議使用阻斷劑預(yù)處理樣本。  

  - 對(duì)于低濃度VWF樣本,可適當(dāng)延長(zhǎng)抗體孵育時(shí)間(如37℃ 30分鐘),但需同步設(shè)置陰性對(duì)照以排除非特異性結(jié)合。  

4. 質(zhì)量控制與校準(zhǔn)

  - 每批次實(shí)驗(yàn)需包含標(biāo)準(zhǔn)品(如不同濃度VWF校準(zhǔn)血漿)和質(zhì)控品,確保抗體效價(jià)穩(wěn)定。若結(jié)果異常,需檢查抗體效期、儲(chǔ)存條件及儀器參數(shù)(如ELISA洗板次數(shù)、流式細(xì)胞儀電壓設(shè)置)。  

  - 不同廠商抗體的表位結(jié)合特性可能存在差異,更換批次或品牌時(shí)需重新驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)條件。  

?5. 數(shù)據(jù)記錄與故障排查

  - 詳細(xì)記錄抗體批號(hào)、稀釋比例及孵育時(shí)間等參數(shù)。若出現(xiàn)信號(hào)弱或無(wú)信號(hào),可嘗試提高抗體濃度或優(yōu)化封閉步驟(如使用5% BSA替代脫脂牛奶)。  

  - 交叉反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)提示:部分VWF單抗可能與其他血漿蛋白(如纖維蛋白原)發(fā)生交叉反應(yīng),需通過(guò)Western Blot或免疫沉淀進(jìn)一步驗(yàn)證特異性。  


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